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原載自：www.diyiqukuai.com.cn[行情動態] 2020-04-09 瀏覽次數：1128

　　對于需要往動物體內注射表達有外源片段的細胞需要構建穩定細胞株，以防止注射入動物體內后，很快外源片段表達丟失。此外，細胞個體差異(同一類細胞，不同個體細胞基因組存在差異)對實驗結果有干擾，需要構建單克隆細胞株去除干擾。

　　由于細胞個體差異對實驗結果有影響。體外培養非原代細胞，多為轉化細胞系或者癌細胞，細胞個體差異大，瞬時轉染或者使用腺病毒/腺相關病毒載體進行轉導更可以反映細胞群體行為。或者使用逆轉錄病毒載體構建混合穩定株。

　　細胞株構建實驗需要注意哪些因素？

　　1.外源插入片段的拷貝數。多數情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。

　　2.整合的幾率，這不僅決定了穩定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩定株。

　　3.整合位點的轉錄活躍度，決定了穩定株中外源片段的表達質量。理想的狀況是單拷貝，但轉錄活性比較高。

　　4.整合后的穩定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩定性，有些區域易發生重組或者丟失，從而導致穩定株再次丟失的情況。

　　5.使用混合穩定株或者獲得多個不同單克隆穩定株。因為穩定整合往往伴隨這插入失活宿主內源基因，所以實驗時通過使用混合穩定株，或者對多個單克隆穩定株進行比較，可以幫助研究人員獲得更精確的實驗數據。