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技術文章 / article
購買細胞株前需要了解的相關技術知識
原載自:www.diyiqukuai.com.cn[技術資料頻道] 2021-06-21 瀏覽次數:1269
穩定細胞株廣泛用于許多重要的應用,包括生物制品(如重組蛋白和單克隆抗體)生產、藥物篩選和基因功能研究。開發穩定細胞株的過程通常始于將所需的質粒轉染至選定的宿主細胞,一般是 CHO 或 HEK 293 細胞。轉染后,研究人員隨后篩選和定量分析高表達的細胞克隆。
細胞培養是細胞株開發的基礎,無論是細胞轉染,培養基優化,還是抗體表達檢測等實驗都在細胞培養的基礎上完成。細胞培養是一個長流程,精細,耗費時間和人力的流程,定期的細胞計數接種,細胞換液,細胞轉染等繁瑣的實驗對工作人員的挑戰極大,且在高通量的人工操作中易帶入污染而導致細胞培養及篩選的失敗。高通量、標準化、自動化的細胞培養能幫助我們在獲得更準確的結果的同時加速細胞株開發進度。
一旦檢測到這些高產細胞株,便進一步對這些細胞和其產生的蛋白質進行驗證。傳統上用于細胞株開發的手動篩選方法耗時且需要大量勞力,因此對于此類工作,存在對高通量、自動化解決方案的巨大需求。
細胞培養方法多樣講解:
透射光分割(分析)算法提高了不同細胞類型計數的準確性,通常用于對未染色的活細胞或固定細胞進行成像。另外還有使用熒光方法檢測細胞核或細胞體的標準細胞計數方法。圖像細胞計數法是一種將低倍率顯微鏡與成像和分析工具相結合的細胞計數技術。圖像細胞計數法有助于在單次檢測中提供關于大量細胞的細胞特性信息。
圖像細胞計數法可用于無標記或熒光標記細胞,可對一個細胞群多次執行,以隨時提供關于細胞動力學的信息。
活細胞成像是通過顯微觀察研究活細胞的細胞結構和功能。它可以實時顯示和定量細胞的動態變化過程。活細胞成像包含多種方向和生物應用 — 無論是對活細胞進行長期動力學檢測,還是進行熒光標記。
細胞的單克隆源性驗證在確保生物制藥產品的純度和均一性上至關重要,FDA 的政策和法規都強制要求生物制藥企業提供清晰圖片證據以證明單克隆抗體研發過程中的單克隆源性。這些要求對我們的單克隆接種及成像設備提出了更高的要求。細胞株開發就是發現源自單個細胞的克隆,其可穩定高表達目標治療性蛋白。此過程的第一步是分離活的單細胞。有限稀釋是一種依賴于統計概率的技術,但很耗時。